凈化車間沉降菌測試操作規(guī)程

1 ?目的

建立一個凈化車間潔凈區(qū)（室）沉降菌檢測的標準操作程序，保證潔凈區(qū)微生物檢測按規(guī)范執(zhí)行。

2 ?范圍

公司所有潔凈區(qū)（室）的沉降菌測定和環(huán)境的驗證。

3 ?責任者

質量技術部對本SOP實施負責。

4 ?程序

4.1??本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)（室）的潔凈度。

4.2??所用的儀器和設備

4.2.1??高壓蒸汽滅菌器

使用時應嚴格按照“高壓蒸汽滅菌器操作規(guī)程”和說明書操作。

4.2.2??恒溫培養(yǎng)箱

必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。

4.2.3??培養(yǎng)皿

采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

4.2.4??培養(yǎng)基

4.2.4.1??普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。

4.2.4.2??培養(yǎng)基的準備及滅菌

4.2.4.2.1??將Φ90mm的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或180℃干熱滅菌2h。

4.2.4.2.2?將培養(yǎng)基加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。

4.2.4.2.3??等瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

48h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。

4.3??測試步驟

4.3.1??采樣方法

將已制備好的培養(yǎng)皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

4.3.2??培養(yǎng)

4.3.2.1??全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.3.2.2??在36℃±1培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。

4.3.2.3??每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

4.3.3??菌落計數(shù)

4.3.3.1??用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.3.3.2??若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

5?注意事項

5.1??測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

5.2??采取一切措施防止人為對樣本的污染。

5.3??對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。

5.4??由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

5.5??采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現(xiàn)變質、破損或污染的應剔除。

6??測試規(guī)則

6.1??測試狀態(tài)

6.1.1??沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)（室）的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內。

6.1.2??沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)（室）已經過消毒。

6.1.3??測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。

6.2??測試人員

6.2.1??測試人同必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。

6.2.2??靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于二人。

6.3??測試時間

6.3.1??對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。

6.3.2??對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。

6.4??沉降菌計數(shù)

6.4.1??采樣點數(shù)目及其布置

6.4.1.1??最少采樣點數(shù)目

沉降法的最少采樣點數(shù)可按表1確定。

6.4.1.2??采樣點的布置

6.4.1.2.1??工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)。

6.4.1.2.2??可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。

6.4.1.2.3??采樣點位置的詳細規(guī)則見附圖。

6.5??記錄

測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。

測試報告的編寫見附表。

6.6??結果

6.6.1??用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

6.6.2平均菌落數(shù)的計算，見下式。

式中：M為平均菌落數(shù)

M1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

M2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

Mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)

n為培養(yǎng)皿總數(shù)。

6.7??結果評定

用平均菌落數(shù)判斷潔凈區(qū)（室）空氣中的微生物。100,000級潔凈區(qū)沉降菌(個／m2)應小于等于l0個；10000級潔凈區(qū)沉降菌(個／m2)應小于等于3個；100級潔凈區(qū)沉降菌(個／m2)應小于等于1個。

6.7.1??潔凈區(qū)(室)內的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。

6.7.2??若某潔凈區(qū)（區(qū)）內的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

沉降菌測試記錄

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